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技術(shù)文章
導(dǎo)語：2004年沃特世推出了UPLC技術(shù)，這一技術(shù)基于小粒徑的分析方法，為使用者帶來了更高的分析效率和更好的數(shù)據(jù)質(zhì)量。二十載光陰流轉(zhuǎn)，我們見證了這一技術(shù)從誕生到發(fā)展，再到如今革新的輝煌歷程。作為液相色譜領(lǐng)域的創(chuàng)新者，沃特世始終致力于推動技術(shù)的進步，堅持以用戶需求為導(dǎo)向，不斷追求更高的分析精度和可靠性。值此UPLC二十周年之際，謹以此推文向UPLC系列產(chǎn)品致敬，敬請期待新品上市。
生物分離分析領(lǐng)域的分析科學(xué)家經(jīng)常面臨多種挑戰(zhàn)，如對復(fù)雜樣品中低豐度的蛋白質(zhì)進行鑒定和定量。由于生物樣品數(shù)量有限，基質(zhì)干擾強烈，為了在有限條件下實現(xiàn)更高靈敏度的分析，分析科學(xué)家們通常通過提高質(zhì)譜儀的靈敏度、使用更細內(nèi)徑的色譜柱、改造LC系統(tǒng)來改善LC/MS分析表現(xiàn)。常規(guī)LC系統(tǒng)改造策略，如進行管路改造或分流，雖然解決了LC系統(tǒng)的管路內(nèi)徑較大易導(dǎo)致樣品擴散損失的問題，但往往會導(dǎo)致結(jié)果的重現(xiàn)性差，儀器性能不穩(wěn)定，從而影響了分析的準確性和可靠性。為了解決以上難題，沃特世于2014年推出ACQUITY UPLC M-Class液相系統(tǒng)，致力于為分析科學(xué)家提供高靈敏、更可靠的實驗結(jié)果。
圖1. ACQUITY UPLC M-Class系統(tǒng)。
作為涵蓋納升級至微升級流速范圍的UltraPerformance LC(UPLC)超高效液相色譜系統(tǒng)，ACQUITY UPLC M-Class不僅提供了優(yōu)異的UPLC分離性能，還兼容不同規(guī)格的色譜柱，流速范圍200 nL/min~100 μL/min，可靈活配置HDX技術(shù)、2D色譜和紫外檢測器，適用于不同領(lǐng)域的各類應(yīng)用。作為質(zhì)譜儀的前端接口，該系統(tǒng)與高分辨質(zhì)譜聯(lián)用，能夠?qū)?fù)雜樣品進行深度分析表征和研究；而與四極桿質(zhì)譜聯(lián)用，則適用于多肽、代謝物的定量分析或其他靶向性分析工作，如生物標記物的驗證等，其出色的靈敏度滿足了日益增長的分析需求，為科學(xué)家們解決復(fù)雜的分析難題提供了有力支持。
圖2. 采用ACQUITY UPLC M-Class系統(tǒng)的HDX-高分辨質(zhì)譜儀平臺。
圖3. 左圖顯示了在線胃蛋白酶消化后鈣調(diào)蛋白肽段的色譜分離圖。右圖顯示了從10秒到240分鐘標記的肽段（ADIDGDGQVNY）的質(zhì)譜結(jié)果。隨著在D2O中暴露時間延長，m/z值會隨之增加。
采用ACQUITY UPLC M-Class系統(tǒng)的HDX平臺可充分利用UPLC的分離能力，與高分辨質(zhì)譜聯(lián)用實現(xiàn)對蛋白質(zhì)構(gòu)象的細微變化進行定量分析。HDX數(shù)據(jù)有助于監(jiān)測蛋白質(zhì)構(gòu)象，定位結(jié)合位點和構(gòu)象變化區(qū)域，為候選藥物與靶蛋白的結(jié)合、生物制藥產(chǎn)品開發(fā)、蛋白質(zhì)間相互作用等研究提供信息。
圖4. ACQUITY UPLC M-Class系統(tǒng)與串聯(lián)四極桿聯(lián)用。
圖5. ionKey/MS系統(tǒng)iKey HSS T3, 100?, 1.8 µm, 150 µm×100 mm與ACQUITY UPLC 2.1 mm內(nèi)徑色譜柱結(jié)果對比。與ACQUITY UPLC 2.1 mm內(nèi)徑色譜柱相比，當注入相同體積時，使用ionKey/MS系統(tǒng)能夠使mafei的檢測靈敏度提高9倍。
微流級ACQUITY UPLC M-Class系統(tǒng)與使用ionKey技術(shù)的串聯(lián)四極桿聯(lián)用，有效提高了電噴霧質(zhì)譜的電離效率，節(jié)約了流動相溶劑和樣品的制備成本，相比于常規(guī)的分析級LC-MS平臺能夠顯著提高生物制藥相關(guān)分析物（如肽、抗體、寡核苷酸）定量的靈敏度。
ACQUITY UPLC M-Class
發(fā)揮優(yōu)異性能，為數(shù)據(jù)保駕護航
靈敏分析：內(nèi)部流路全惰性系統(tǒng)材質(zhì)和專為微升級分離而優(yōu)化設(shè)計的新型微升級ESI質(zhì)譜噴針、低擴散流通池等，顯著提高目標物的回收率，保持峰容量，保證了光學(xué)檢測的高分離度和靈敏度。
出色分離度：沃特世還推出了專為低擴散納流液相色譜系統(tǒng)而設(shè)計的Waters nanoEase M/Z納流和微流LC-MS色譜柱，通過ZenFit連接技術(shù)改善由連接變化引起的色譜表現(xiàn)不一致情況。這些分析柱充分利用了固定相亞2 µm顆粒技術(shù)的分離能力，適用于復(fù)雜肽和蛋白質(zhì)納升級、毛細管級和微升級UPLC分離。
圖6. 具有ZenFit連接技術(shù)，適用于納升級到微升級LC-MS分析的沃特世色譜柱。
十年來，穩(wěn)定可靠的納升至微升級ACQUITY UPLC M-Class分離系統(tǒng)以其性能和應(yīng)用領(lǐng)域，為生物分離分析領(lǐng)域的研究人員提供了強大的支持，在蛋白質(zhì)組學(xué)、代謝分析、代謝物鑒定和藥代動力學(xué)研究等領(lǐng)域均有廣泛應(yīng)用。
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